เดียวยีน การวิเคราะห์เป็นวิธีการทดสอบทางพันธุกรรมที่กำหนดเป้าหมาย
ภายในกรอบของขั้นตอนนี้หากสงสัยว่าเป็นโรคทางพันธุกรรมซึ่งเกิดจากการเปลี่ยนแปลงเพียงครั้งเดียวในไฟล์ ยีนยีนที่สงสัยว่าเป็นสาเหตุได้รับการตรวจสอบ นอกจากนี้ยังมักทำเป็นประจำเป็นส่วนหนึ่งของการตรวจคัดกรอง
ข้อบ่งชี้ (พื้นที่ใช้งาน)
- การวินิจฉัยโรคโมโนเจนิกเช่น โรคปอดเรื้อรัง.
ขั้นตอน
วัสดุที่จำเป็น
- เฮปารินในเลือด (ขั้นต่ำ 1-2 มล.)
การเตรียมผู้ป่วย
- ไม่จำเป็น
ปัจจัยก่อกวน
- ไม่เป็นที่รู้จัก
วิธีการทางห้องปฏิบัติการ
บ่อยที่สุดวิธีการเรียงลำดับที่ใช้ใน single-ยีน การวิเคราะห์เป็นวิธีการแซงเจอร์หรือเรียกอีกอย่างว่าการสังเคราะห์การยุติสายโซ่ซึ่งเป็นอันดับแรกในการแยกดีเอ็นเอออกจาก เลือด. จากนั้นทั้งหมด ไฮโดรเจน พันธะที่ทำหน้าที่ยึดดีเอ็นเอสองเส้นเข้าด้วยกันขาด หลังจากให้ความร้อนที่ 94-96 ° C เป็นเวลาหนึ่งนาทีจะมีเกลียวสองเส้น จากนั้นจะเกิดการผสมพันธุ์แบบไพรเมอร์ที่เรียกว่าไพรเมอร์โดยการติดไพรเมอร์ เกิดขึ้นที่อุณหภูมิประมาณ 60 ° C ไพรเมอร์คือโอลิโกนิวคลีโอไทด์ (โอลิโกเมอร์ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์สองสามตัว) ซึ่งทำหน้าที่เป็นจุดเริ่มต้นสำหรับการจำลองดีเอ็นเอ เอนไซม์ เช่น DNA polymerase หลังจากการผสมรองพื้นไพรเมอร์การขยายจะเกิดขึ้นซึ่งอุณหภูมิจะสูงขึ้นถึง 72 ° C สิ่งนี้ช่วยให้ไพรเมอร์ยึดติดกับ DNA polymerase (เอนไซม์ ที่สังเคราะห์ DNA) หลังจากเฉลี่ย 30 รอบขั้นตอนสามารถหยุดได้
การวิเคราะห์เพิ่มเติมดำเนินการโดย เส้นเลือดฝอย อิเล็กโตรโฟรีซิสในซีเควนเซอร์อัตโนมัติ ผลลัพธ์ที่ได้เรียกว่า electropherogram แสดงสีที่แตกต่างกันซึ่งบ่งบอกถึงลำดับฐาน
ด้วยวิธีนี้สามารถตรวจพบการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับฐานนิวคลีอิกเพียงเซลล์เดียวภายในยีนหรือที่เรียกว่าการกลายพันธุ์แบบจุด
